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穩定細胞系是指將外源基因整合到宿主細胞基因組中，使外源基因能夠在宿主細胞中長(cháng)期穩定表達，這樣的細胞系稱(chēng)為穩定細胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上，通過(guò)轉染宿主細胞，外源基因整合到宿主染色體上，用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選即可得到成功整合目的基因的細胞。

在試驗過(guò)程中，常用的真核表達載體抗性篩選標志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)等。通過(guò)篩選可得到符合實(shí)驗要求的穩定高表達目的蛋白細胞株或者穩定沉默目的基因的細胞株。

其建立的原理是，將我們所要的目的基因真核到宿主細胞上，隨著(zhù)細胞的生長(cháng)繁殖，目的基因可以穩定的表達，在通過(guò)抗生素的不斷加壓篩選，得到構建穩定細胞系的過(guò)程。相對于瞬時(shí)轉染，穩定轉染技術(shù)持續周期長(cháng)，細胞整合穩定，能夠滿(mǎn)足后期對蛋白的大量需求。

以下情況需要使用穩定細胞系：

1、實(shí)驗周期長(cháng)，要求外源DNA在分裂細胞中長(cháng)期表達，>2周。

2、需要構建誘導表達系統。當目的基因的過(guò)表達或者干擾需要時(shí)空特異性，或者會(huì )引起細胞毒性等不利影響。

3、基因敲除/插入等修飾宿主細胞基因組的實(shí)驗。

4、篩選拷貝數適宜的細胞。

5、對于某些很難轉染的細胞種類(lèi)。即使病毒載體也無(wú)法實(shí)現高效率轉導。

6、通過(guò)構建穩定細胞株實(shí)現更好的基因干擾效果。

7、后續實(shí)驗中需要將轉染細胞注射進(jìn)入動(dòng)物體內。

8、需要構建單克隆細胞株可以去除個(gè)體差異。

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